RIP-seq
一、基本概念
RIP-seq(RNA Immunoprecipitation sequencing)是一种结合RNA免疫沉淀(RNA immunoprecipitation, RIP)和高通量测序技术的方法,用于研究RNA与蛋白质相互作用的全基因组水平。研究者可以使用特定的抗体选择性地富集RNA与感兴趣的RNA结合蛋白,随后通过高通量测序技术分析富集的RNA,揭示RNA与蛋白质之间的相互作用网络。
二、研究意义
1.揭示RNA与蛋白质相互作用:RIP-seq可以帮助研究者全面了解RNA与特定蛋白质之间的相互作用,包括长非编码RNA(lncRNA)、microRNA(miRNA)、mRNA等与结合蛋白之间的交互作用。
2.发现新的RNA结合蛋白:通过RIP-seq可以发现新的RNA结合蛋白,并深入了解这些蛋白质在基因表达调控中的作用。
3.揭示细胞信号传导网络:RIP-seq可以揭示RNA与蛋白质之间的相互作用网络,有助于理解细胞信号传导途径及调控机制。
4.研究疾病机制:通过分析RNA与蛋白质的相互作用,可以揭示在疾病发生发展中RNA结合蛋白的异常表达或功能异常,为疾病机制研究提供新的线索。
总的来说,RIP-seq在揭示RNA与蛋白质相互作用、发现新的RNA结合蛋白、研究细胞信号传导网络和疾病机制等方面具有重要的研究意义,为深入理解基因表达调控、生物学过程和疾病发生提供了有力的工具和方法。
三、样本选择/数据准备
取样应遵循代表性、准确性、重复性、及时性、低温性,取样及预处理都应该迅速且在无菌条件下进行。
动物样本:小型动物组织样本应>1g,个体较大动物组织样本应>2g,脂肪组织样本应>10g,昆虫等整只个体应>3g;
肿瘤组织样本>1g;
植物组织:花序、花蕊、花粉:>2g,果实样本>10g,其他植物组织样本>5g;
细胞样本:1×108个
测序数据量一般为6Gbase即可满足ATAC-seq测序需求。(注:该项技术需要所研究物种的完整参考基因组序列)
四、技术流程